細(xì)胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是利用免疫技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，原理就是利用抗原-抗體反應(yīng)之后，采用熒光標(biāo)記，標(biāo)記完成后，顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)某種抗原成分的多少，從而做出一個(gè)定位研究，也可以為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)提供一個(gè)明確的指導(dǎo)，細(xì)胞免疫熒光具有敏感性強(qiáng)、特異性高、速度快的特點(diǎn)，是目前比較常用的組織學(xué)技術(shù)，也是比較精確的。
　　細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟：
　　首日：
　　1.在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；
　　2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min，PBS浸洗玻片3次，每次3min；
　　3.0.5%TritonX-100(PBS配制)室溫通透20min（細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原省略此步驟）；
　　4.PBS浸洗玻片3次，每次3min，吸水紙吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min；
　　5.吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜；
　　次日：
　　6.加熒光二抗：PBST浸洗爬片3次，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進(jìn)行。
　　7.復(fù)染核：滴加DAPI避光孵育5min，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行染核，PBST5minx4次洗去多余的DAPI；8.用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。